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紫外分光光度法測(cè)定維生素A的含量

更新時(shí)間:2019-09-24      點(diǎn)擊次數(shù):1883

紫外分光光度法測(cè)定維生素A的含量

1.原理

維生素A的異丙醇溶液在325 nm波長(zhǎng)下有zui大吸收峰,其吸光度與維生素A的含量成正比。

本法的靈敏度較比色法高,可測(cè)定維生素A含量低于5μg/g的樣品。主要缺點(diǎn)是在維生素Azui大吸收波長(zhǎng)325 nm附近許多其他化合物也有吸收,干擾測(cè)定,故本法適用于透明魚(yú)油,維生素A的濃縮物等純度較高的樣品。對(duì)于一般樣品,測(cè)定前必須先將脂肪抽提出來(lái)進(jìn)行皂化,萃取其不皂化部分,再經(jīng)柱層析除去干擾物。

2.儀器

3.試劑

①異丙醇。

②維生素A標(biāo)準(zhǔn)溶液:稱取1 g相當(dāng)于50 000單位維生素A的濃魚(yú)肝油0.1000 g,加異丙醇溶解,定容至125 mL。此溶液1 mL相當(dāng)于40單位(即40 IU.mL-1)。

4.測(cè)定步驟

①標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制:分別取維生素A標(biāo)準(zhǔn)溶液(40 IU·mL-1)O.5、1.0、1.5、2.0、2.5、3.0、4·0 mL,于10 mL棕色容量瓶中,用異丙醇定容。以空白液調(diào)儀器零點(diǎn),于紫外分光光度計(jì)上在325 nm波長(zhǎng)下分別測(cè)定吸光度,繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。

②樣品測(cè)定:稱取適量樣品,按照三氯化銻比色法進(jìn)行皂化、提取、洗滌、濃縮、蒸發(fā)醚層后,迅速用異丙醇溶解并移人50 mL容量瓶中,用異丙醇定容,于紫外分光光度計(jì)325nm處測(cè)定其吸光度,從標(biāo)準(zhǔn)曲線上查出相當(dāng)?shù)木S生素A含量。

5.計(jì)算

X=[(c*V)/m]*100

 

式中:X——樣品維生素A的含量,IU·(100 g) -1;

   c——由標(biāo)準(zhǔn)曲線查得的維生素A含量,IU·mL-1;    .

   V——樣品的異丙醇溶液體積,mL;

   m——樣品質(zhì)量,g。

 

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